1.1 人眼：人眼观察物体的能力是有限的。一般的情况下，在25cm的明视距离内，人眼只能分辨相距0.1-0.2mm的两个物体。也就是说，当两个物体相距不到0.1mm的时候，人眼就会把它们看成是一个物体了。这个极限便称为人眼的分辨本领。 [5T{`&
:41Ch^\E
人眼视锥细胞直径为4微米，对应的视角约为30秒，这个角度就是视角的极限。一般要能清晰的分辨两个点，视角须在1分以上。高1米的物体距眼睛3400米时，视角为1分。 aFf( m-
q3 7d:Hp
1.2 放大镜：约在四百年前眼镜片工匠们开始磨制放大镜。当时的放大镜的放大倍数只有3—5x kl+^0 i
0~( f<:
1.3 显微镜： T
P#Hq
?#]wx H,
1590年，荷兰和意大利的眼镜制造者造出类似显微镜的放大仪器。生物论坛,生物秀论坛,中国生物科学论坛, tOT(!yz
7AouiL 2-W
1673～1677年期间，列文胡克制成单组元放大镜式的高倍显微镜 Mep
c t
19世纪70年代，德国人阿贝奠定了显微镜成像的古典理论基础。 c80!Ub@
1850年出现了偏光显微术； k[<Ux h%
1893年出现了干涉显微术； -Ed<Kl
1935年荷兰物理学家泽尔尼克创造了相衬显微术， 2T &n6t$p
zg+6<
.Sf
荷兰眼镜制造商J.Janssen和Z.Janssen父子制作了第一台复式显微镜，尽管其放大倍数不超过10倍，但具有划时代的意义 ~[ZRE @
.tQeOZW'
1665 英国人Robert Hook用自己设计与制造的显微镜（放大倍数为40-140倍)观察了软木（栎树皮)的薄片，第一次描述了植物细胞的构造，并首次用拉丁文cella（小室)这个词来称呼他所看到的类似蜂巢的极小的封闭状小室（实际上只是观察到到纤维质的细胞壁)。 glI4Jb_[
=4_Er{AT
列文虎克和他的显微镜（约1680 ） !U[/P6
+0
jBLLx {
1680荷兰人A. van Leeuwenhoek成为皇家学会会员，一生中制作了200多台显微镜和500多个镜头。他是第一个看到活细胞的人，观察过原生动物、人类精子、鲑鱼的红细胞、牙垢中的细菌等等。 !L?diR
(Ee 5Af,4
2 显微镜的光学原理 7%)KB4(\_
a]4h5kJ';
2.1折射和折射率.光线在均匀的各向同性介质中，两点之间以直线传播，当通过不同密度介质的透明物体时，则发生折射现象，这是由于光在不同介质的传播速度不同造成的。 $z
\H*
B$D7} =|kc
凸透镜的五种成象规律 0T7c =5z4W
(1) 当物体位于透镜物方二倍焦距以外时，则在象方二倍焦距以内、焦点以外形成缩小的倒立实象； .d;|iwl
(2) 当物体位于透镜物方二倍焦距上时，则在象方二倍焦距上形成同样大小的倒立实象； :ND e<6?u
(3) 当物体位于透镜物方二倍焦距以内，焦点以外时，则在象方二倍焦距以外形成放大的倒立实象； b-Xc6f
(4) 当物体位于透镜物方焦点上时，则象方不能成象； 6i7 +.#s
(5) 当物体位于透镜物方焦点以内时，则象方也无象的形成，而在透镜物方的同侧比物体远的位置形成放大的直立虚象。 /c|X:F!;X#
I;GbS`
2.3显微镜的成像原理 8kYI ~
显微镜和放大镜起着同样的作用，就是把近处的微小物体成一放大的像，以供人眼观察。只是显微镜比放大镜可以具有更高的放大率而已。物体位于物镜前方，离开物镜的距离大于物镜的焦距，但小于两倍物镜焦距。所以，它经物镜以后，必然形成一个倒立的放大的实像A'B'。 A'B'靠近F2的位置上。再经目镜放大为虚像A''B''后供眼睛观察。目镜的作用与放大镜一样。所不同的只是眼睛通过目镜所看到的不是物体本身，而是物体被物镜所成的已经放大了一次的像。 9ymx;
>p?Vv0*
3 显微镜的几个基本概念 1a@b-V2
d&
3.1 光源：能发射光波的物体。可见光频率范围：7.5×1014-3.9×1014 Hz。真空中对应的波长范围：390nm – 760nm相应光色：紫、蓝、青、绿、黄、橙、红 #BhDC.CcW
U@:h';.
3.2数值孔径 Z(wj5;[G
⊙ 数值孔径简写NA，数值孔径是物镜和聚光镜的主要技术参数，是判断两者（尤其对物镜而言）性能高低的重要标志。其数值的大小，分别标刻在物镜和聚光镜的外壳上。 H7?Sd(U
⊙ 数值孔径（NA）是物镜前透镜与被检物体之间介质的折射率（n）和孔径角（u）半数的正弦之乘积。用公式表示如下：NA=nsinu/2 X')t6DQ( I
⊙ 孔径角又称"镜口角"，是物镜光轴上的物体点与物镜前透镜的有效直径所形成的角度。孔径角越大，进入物镜的光通亮就越大，它与物镜的有效直径成正比，与焦点的距离成反比。 MiN|u
⊙ 显微镜观察时，若想增大NA值，孔径角是无法增大的，唯一的办法是增大介质的折射率n值。基于这一原理，就产生了水浸物镜和油浸物镜，因介质的折射率n值大于1，NA值就能大于1。 D&-cNxh
⊙ 数值孔径最大值为1.4，这个数值在理论上和技术上都达到了极限。目前，有用折射率高的溴萘作介质，溴萘的折射率为1.66,所以NA值可大于1.4。 pSKw Xx
⊙ 这里必须指出，为了充分发挥物镜数值孔径的作用，在观察时，聚光镜的NA值应等于或略大于物镜的NA值。 $az9Fmta
⊙ 数值孔径与其他技术参数有着密切的关系，它几乎决定和影响着其他各项技术参数。它与分辨率成正比，与放大率成正比，与焦深成反比，NA值增大，视场宽度与工作距离都会相应地变小。 <1eD*sC?g
3.3分辨率 F|bg2)|du8
显微镜的分辨率是指能被显微镜清晰区分的两个物点的最小间距，其计算公式是σ=λ/NA式中σ为最小分辨距离；λ为光线的波长；NA为物镜的数值孔径。可见物镜的分辨率是由物镜的NA值与照明光源的波长两个因素决定。NA值越大，照明光线波长越短，则σ值越小，分辨率就越高。要提高分辨率，即减小σ值，可采取以下措施： 3](At%ss
a. 降低波长λ值，使用短波长光源; M'5PPBSR
b. 增大介质n值以提高NA值（NA=nsinu/2）; w0 &|8y
c. 增大孔径角u值以提高NA值; %*a%F ~Ss
d. 增加明暗反差.
