显微摄影是一项重要的显微技术,同再现显微镜中物体影象的各种方法比较,显微摄影是最好的方法。它对以显微镜作为研究工具的研究人员是必备的手段,尤其在研究染色体及其分子特征时,就更加显得必要了。现在数码相机的问世,又使显微摄影变得更为简便,且效果好。在有关学术研究和理论探讨时,一帧好的显微照片,可以省去许多的文字描述,并且使人心悦诚服。何况在生物学领域中,确有不少问题的研究,必须借助显微摄影。 ]GYO`,
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下面,仅以植物染色体作为拍摄材料,概述显微摄影的基本方法,数码显微摄影的操作流程和传统的显微摄影基本一样,只是省去了底片和暗房技术,由计算机完成。 4-[L^1%S[
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一、显微摄影对制片标本的要求 QP|Ou*Qm)
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染色体只见于有丝分裂和减数分裂的细胞核中,根尖、茎端、幼嫩花药和胚珠是镜检染色体的材料,尤以根尖和花药更为常用。观察染色体的形态、结构和数量,常用酶解或压片法制片。此法能保持染色体的完整,并能接近于活体状态。一张好的显微照片,来源于完好的染色体制片标本。适于拍照的制片标本,应具下列条件: OiX>^_iDt
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1、选用标准的载玻片和盖玻片 光源入射光束,经载玻片透射标本,再经盖玻片进入物镜,处于光路之中的玻璃,应是表面无伤,内无气泡;外无霉斑。这样可以杜绝光线乱反射,防止阻光、降低亮度以及有损清晰度。载玻片厚度不宜超出聚光镜的焦距,一般在2毫米以内,可将光源的光束集中于载玻片的标本上。盖玻片的标准厚度为0.17毫米,若使用厚度大于工作距离的盖玻片,物镜前透镜会触及盖玻片,同时不能准焦;盖片厚,球差就大,会降低影象质量。有效盖片厚度,包括封固剂的厚度,即树胶或尤派胶用量,因此,封固剂要调稀,少许滴加一薄层。 [7?K9r\#
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2、染色体处于相宜的时期,平展逸散,完整无损 染色体的计数和组型分析,以有丝分裂的中期(或晚前期),减数分裂的终变期和粗线期为宜。这时染色体收缩变短,呈典型状态,易识别。通过前处理的精细加工,染色体相互逸散,互不接触,并尽可能使之平展于同一水平面上,又不失细胞的完整轮廊(图3-1)。 vm)&