starshine |
2008-03-04 10:18 |
第一节 金相显微镜
RDFOUqS UXU!sd 前面讲述了显微镜的光学原理以及附件,下面将分类介绍一下各类研究用镜检术。在材料研究领域,反射式明场显微镜得到广泛应用,在此基础上各种特殊的镜检方法也得到应用,如暗场,偏光,相衬,干涉,荧光,这些镜检方法在高档显微镜上均能同时实现。 ?U}Ml]0~ 一. 明视野观察(Bright field) :Ng4?
+@r SLCV|@G 明视野镜检是大家比较熟悉的一种镜检方式,广泛应用于病理、检验,用于观察被染色的切 片,所有显微镜均能完成此功能。在此不再赘述。 t,CC~ MXQS6F# 二. 暗视野观察(Dark field) .W[[Z;D \a\J0&Z 暗视野实际是暗场照明。它的特点和明视野不同,不直接观察到照明的光线,而观察到的是被检物体反射或衍射的光线。因此,视场成为黑暗的背景,而被检物体则 呈现明亮的像。暗视野的原理是根据光学上的丁道尔现像,微尘在强光直射通过的情况下,人眼不能观察,这是因为强光绕射造成的。若把光线斜射它,由于光的反 射,微粒似乎增大了体积,为人眼可见。暗视野观察所需要的特殊附件是暗视野聚光镜。它的特点是不让光束由下至上的通过被检物体,而是将光线改变途径,使其 斜射向被检物体,使照明光线不直接进入物镜,利用被检物体表面反射或衍射的光形成明亮图像。暗视野观察的分辨率远高于明视野观察,最高达0.02— 0.004mm。 | dLA D4% kaKV{;UM 三.相衬镜检法(Phase contrast) P:`tL)W_ d5b \kR r 在光学显微镜的发展过程中,相衬镜检术的发明成功,是近代显微镜技术中的重要成就。我们知道,人眼只能区分光波的波长(颜色)和振幅(亮度),对于无色通明的生物标本,当光线通过时,波长和振幅变化不大,在明场观察时很难观察到标本。 Yh^~4S? 6[iu CMOZ 相衬显微镜利用被检物体的光程之差进行镜检,也就是有效地利用光的干涉现像,将人眼不可分辨的相位差变为可分辨的振幅差,即使是无色透明的物质也可成为清晰可见。这大大便利了活体细胞的观察,因此相衬镜检法广泛应用于倒置显微镜。 BkZmE, T[$! ^WT 1. 相衬镜检法在装置上与明场不同,有一些特殊要求: HizMjJ| {9 PeBc ( 1 ). 环状光阑(Ring slit): 装在聚光镜的下方,而与聚光镜组合为一体——相衬聚光镜。它是由大小不同的环形光阑装在一圆盘内,外面标有10X、20X、40X、100X等字样,与相对应倍数的物镜配合使用。 /CXrxeo S7/0B4[ ( 2 ). 相板(Phase plate): 装在物镜的后焦平面处,它分为两部分,一是通过直射光的部分,为半透明的环状,叫共轭面;另一是通过衍射光的部分,叫“补偿面”。有相板的物镜称“相衬物镜”,外壳上常有“Ph”字样。 wF@mHv \&|zD"* 2. 相衬镜检法是一种比较复杂的镜检方法,想要得到好的观察效果,显微镜的调试非常重要。除此之外还应注意以下几个方面。 xKol ^+v6?%m ( 1 ). 光源要强,全部开启孔径光阑; fJjtrvNy) HOEjLwH ( 2 ). 使用滤色片,使光波近于单色; !a(#G7zA )_7OHV *3 四.微分干涉相衬镜检术(Differential interference contrast DIC) mAI< | |